Exotoxinas proteicas de cepas de Vibrio penaeicida y Vibrio nigripulchritudo, patogénicas para camarón

Resumen

La patogenicidad de dos cepas de V. penaeicida, AM101 y KH-1, con diferente origen geográfico, y de la cepa AM102 de V. nigripulchritudo fue investigada en camarones azules juveniles de la especie Litopenaeus stylirostris. Las bacterias vivas y las fracciones proteicas (FPs) obtenidas del sobrenadante libre de células (SLC) fueron usadas en un ensayo experimental. Las cepas AM102, AM101 y KH-1 produjeron respectivamente una mortalidad de 60, 54 y 12%, 96 h después de la infección al usar una suspensión bacteriana de 10⁴ ufc mL^–1. Factores tipo toxina exocelular fueron evidenciados en los SLC de las cepas de Nueva Caledonia (AM102 y AM101) pero no en la cepa japonesa (KH-1). A 48 h post-inyección de cada SLC, el porcentaje de mortalidad fue respectivamente de 96, 98 y 5% cuando estas cepas fueron cultivadas a 20°C, mientras que sólo 0, 16, y 5% de mortalidad fue observado cuando las cepas fueron cultivadas a 30°C. Se observó una clara diferencia en la patogenicidad entre las dos cepas de V. penaeicida provenientes de diferentes orígenes geográficos (AM101 y KH-1). Las FPs fueron obtenidas a partir del SLC de todas las cepas cultivadas a 20°C, por medio de precipitación con sulfato de amonio. Se obtuvo una mortalidad significativa con las FPs precipitadas con 40% de sulfato de amonio, en comparación con las precipitadas con 60 y 80%. Los camarones inyectados con FPs40 de AM102, AM101 y KH-1 a una dosis de 20 µg de proteína org^–1 tuvieron una mortalidad de 100, 90 y 60%, respectivamente, 46 h después del ensayo. La cepa AM101 mostró una dosis letal media de aproximadamente 5 µg proteína org^–1 (1–1.25 µg de proteína g^–1 de peso del cuerpo), 59 h después de ser inyectada. Las FPs40 de las cepas de Nueva Caledonia fueron sensibles al tratamiento con calor y proteinasa K, reforzando la hipótesis de su naturaleza proteica. Sorpresivamente, las FPs40 de cada cepa bacteriana mostraron bandas proteicas similares cuando se analizaron por SDS-PAGE, sugiriendo que las cepas ensayadas comparten un elemento exotóxico en común, independientemente de su diferente origen geográfico.